基因型

MATα ura3-52 trp1 leu2?1 his3?200 pep4::HIS3prb1?1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)

簡(jiǎn)要說明

EBY100菌株是釀酒酵母菌株，屬于真核細(xì)胞。一般的針對(duì)原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對(duì)酵母是無效的，因此為了防止大腸桿菌等原核生物對(duì)酵母培養(yǎng)菌株污染，往往會(huì)在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和ka那霉素的抗生素，來抑制細(xì)菌菌的污染和生長(zhǎng)。AngYuBio EBY100感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存3個(gè)月，pYD1質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μgDNA。

操作說明

1、取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重復(fù)一次)，100µl冰上融化的感受態(tài)細(xì)胞，PEG/LiAc 500µl，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉(zhuǎn)化效率,可不做）

4. 42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

5. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復(fù)蘇1h；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，可不做）

6. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)48-96h。

注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. PEG溶液在低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫下溶解后使用。