當(dāng)前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > Abnbio感受態(tài)細(xì)胞 > 表達(dá) 感受態(tài)細(xì)胞 > ABG211-50Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
簡要描述:Rosetta-gami 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro]gor522::Tn10trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)
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詳細(xì)介紹
品牌 | Abnbio | 貨號 | ABG211-50 |
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規(guī)格 | 50X100ul | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 感受態(tài)細(xì)胞 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
基因型
D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro]gor522::Tn10trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)
簡要說明
Rosetta-gami 2(DE3) 菌株集合了Rosetta 2和Origami2兩種菌株的優(yōu)點(diǎn): pRARE2賦予其Rosetta2菌株的優(yōu)點(diǎn)——補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA,CUA,CCC,GGA和CGG)對應(yīng)的tRNA,提高外源基因的表達(dá)水平。gor522::Tn10trxB賦予其Origami2菌株的優(yōu)點(diǎn)——突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和gu胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它們是還原途徑的兩個關(guān)鍵酶,其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強(qiáng)蛋白的可溶性;同時該菌株不具有卡na霉素抗性,可用于具有卡na霉素抗性質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)適合T7啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)。Rosetta-gami2(DE3)菌株具有l(wèi)u霉素,lian霉素,四環(huán)素抗性,由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108 cfu/μg DNA。
操作說明
1、Rosetta-gami 2(DE3)菌株感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手撥EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2.混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4.誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。
5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
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