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Chemically發(fā)根(熱激)感受態(tài)

簡要描述:Ar A4 Chemically Competent Cell/Chemically發(fā)根(熱激)感受態(tài)
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:Ar A4
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-25
  • 訪  問  量:255

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABN400-100
規(guī)格100支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

Ar A4 Chemically Competent Cell  發(fā)根(熱激)感受態(tài)細(xì)胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)

簡要說明:

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,胡蘿卜,甘草等),同時(shí)具有ka那霉素抗性。Ar.A4化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pK7WGF2質(zhì)粒(zhuang觀霉素抗性)檢測,轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說明:

一:取-80℃保存的Ar A4發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。

二:每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,第一次使用前最好做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手快速、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻,依         次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

三:冰浴中拿出放室溫,加入700μl 無抗生素的TY 液體培養(yǎng)基,于 28℃振蕩培養(yǎng) 2小時(shí)。

四:6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天

注意事項(xiàng):

一:加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級。

二:混勻質(zhì)粒時(shí)應(yīng)用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻,務(wù)必使質(zhì)??焖?、均勻分散開,與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌         量。

三:平板上陽性克隆密度過大時(shí),由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

四:Ar.A4具有ka那霉素抗性,不可用于具有ka那霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

備注:

1、農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:

image.png

2、常用農(nóng)桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

image.png

3、TY配方(1L):

Tryptone 5gYeast extract 3g補(bǔ)水到1L體積,wan全溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。若配制TY固體培養(yǎng)基,則加入15g 瓊脂粉


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